产品货号:
GL0273
中文名称:
DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)
英文名称:
产品规格:
10mL
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1~3天
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将DNA导入细胞的方法很多,采用DEAE-葡聚糖转染法主要优点是相对简单、快速、同次试验内和不同次实验间的重复性较好,该法尤其适用于瞬时转染。DEAE-葡聚糖溶液(10mg/mL)采用特殊溶剂溶解,经过滤除菌,临用前37℃保温并充分混匀。
组分 | 规格 |
DEAE-葡聚糖溶液(10mg/mL) | 10mL |
说明书 | 1份 |
保存:-20℃,有效期6个月
- 某些特点细胞需要较长的转染时间,因为氯喹有细胞毒性,可在转染的最后时期加入。
- 转染时,摇动细胞可保障转染效率均一,最适转染时间需通过实验确定。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 取对数生长期的细胞,制备成细胞悬液。将细胞密度调整到5×105个/ml接种至6孔板,培养12~24h。
- 用蒸馏水或TE将质粒DNA稀释至0.1~1μg/μL,将DNA溶液直接加到转染培养液至其终浓度为1.0μg/mL。
- 将DEAE-葡聚糖溶液(10mg/mL)预热至37℃并颠倒混匀,加到DNA/转染培养液使DEAE-葡聚糖终浓度为100μg/mL,最适浓度需要自行摸索。
- 将50~70%汇片的细胞培养物中的培养液轻轻吸出,换上适合体积的37℃的补充有DEAE-葡聚糖/DNA/转染培养液,37℃孵育4h。
- 倒置显微镜下观察细胞,细胞内会出现颗粒,有的细胞核出现固缩,有的细胞边缘出现部分破碎。有效的DEAE-葡聚糖转染常伴有25~75%的细胞死亡。
- 换用100mmol/L氯喹培养液继续培养,进行下游实验。
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